BD PAXgene Blood RNA Tubes (IVD)

产品详细信息

PAXgene血液RNA系统由PAXgene血液RNA管(可从BD，猫。不。762165)用于血液采集、稳定和运输，PAXgene血液RNA试剂盒用于硅胶膜RNA分离和自旋柱格式的纯化。净化可以手工进行，使用微量离心机，或在QIAcube自动进行。ce - ivd标记管和试剂盒提供精确的性能规格，确保高度可靠的RNA纯化。

性能

PAXgene血液RNA管的目的是收集的全血和稳定细胞内RNA长达3天的年龄在18岁至25岁之间°C(见图“RNA稳定°C:年龄在18岁至25岁之间的安全系数"和“RNA稳定°C:年龄在18岁至25岁之间IL1B")或5天2 - 8°C(见图“RNA稳定在2 - 8°C:安全系数"和“RNA稳定在2 - 8°C: IL1B")。目前可用的数据显示，细胞RNA在-20°C或-70°C下至少可以稳定96个月。

使用PAXgene Blood RNA System纯化的总RNA纯度高，A260/A280值在1.8 - 2.2之间，≤1.0% (w/w)基因组DNA。当使用高达30%的洗脱液时，至少95%的样品在RT-PCR中没有显示抑制作用。

平均样品制备时间(基于12个样品制备的数据)约为90分钟，只有40分钟的动手时间。在处理过的样本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA产量≥3µg。由于产量高度依赖于捐助者，个别产量可能有所不同。个人捐赠者,PAXgene血液RNA系统提供高度可再生的和可重复的收益率(见图“可再生的和可重复的RNA净化"和“重复性和再现性的RNA收益率")和可重复的和可重复的rt - pcr(见图“用户之间的重现性"和“再现性工具包之间很多",和表格)，使其在临床诊断测试中非常可靠。

经处理的样本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA产量≥3 μg。图“RNA产率和纯度-自动化处理"表示的是由3个操作员使用3个试剂盒批次的自动化方案制备的共288个样品的RNA产率。由于这些研究使用的是汇集的血液样本，而不是单独的PAXgene血液RNA管，因此结果不能反映单个血样的RNA产量。由于产量高度依赖于捐助者，个别产量可能有所不同。

当使用高达30%的洗脱液时，至少95%的样品在RT-PCR中没有显示抑制作用。使用自动化程序，通过定量、实时RT-PCR检测rna阴性样本(水)和rna阳性样本(人类全血)的β -球蛋白和FOS转录本序列，无法检测样品之间的交叉污染。

用PAXgene血RNA系统纯化的RNA和自动化的协议是高纯度的，因为缺乏RT-PCR抑制(见上文)和A260/A280值在1.8和2.2之间。通过对β -肌动蛋白基因序列的实时定量PCR检测，在≥95%的样本中，基因组DNA含量≤1% (w/w)。图“RNA产量和纯度-自动化处理"显示了使用3个试剂盒批次的自动化方法制备的共288个样品的A260/A280值和相对基因组DNA。

使用PAXgene血RNA系统的RNA纯化自动化方案提供了高重复性和可重复性的RT-PCR结果，如图“自动和手动方案之间的重现性"所示，这使得它在临床诊断测试中非常可靠。

过程

PAXgene Blood RNA程序简单，可以使用手动或自动程序进行(见流程图“手动PAXgene Blood RNA程序"和“自动PAXgene Blood RNA程序")。

手动PAXgene血液RNA程序

将重悬的颗粒与蛋白酶K一起孵育在优化的缓冲液中，以实现蛋白质消化。通过PAXgene Shredder旋转柱进行额外的离心，使细胞裂解液均质并清除残留的细胞碎片，并将流过部分的上清液转移到新鲜的微型离心管中。加入乙醇调节结合条件，将裂解液应用于PAXgene RNA自旋柱。在一个简短的离心过程中，当污染物通过时，RNA被选择性地结合到PAXgene硅膜上。在几个有效的清洗步骤中去除剩余的污染物。在第一和第二冲洗步骤之间，用DNase I处理膜以去除微量的结合DNA。洗涤步骤结束后，RNA在洗脱缓冲液中洗脱并热变性。

全自动PAXgene血液RNA程序

QIAcube全自动样品制备，遵循与手动程序相同的步骤，使您可以继续使用PAXgene血液RNA试剂盒纯化高质量的RNA。

自动RNA纯化协议包括两部分(或协议)，“PAXgene Blood RNA Part A"和“PAXgene Blood RNA Part B"，在这两部分之间有一个简短的人工干预。

将离心、洗涤、重悬的核酸颗粒从PAXgene Blood RNA Tube转移到加工管中，加工管放置在QIAcube工作台上的热摇器单元中。操作者从菜单中选择并启动“PAXgene Blood RNA Part A"协议。QIAcube完成了在洗脱缓冲液中进行RNA洗脱的步骤。操作人员将含有纯化RNA的微离心管转移到QIAcube的热激器单元中。操作者从菜单中选择并启动“PAXgene Blood RNA Part B"协议，QIAcube进行热变性。

平均样品制备时间(基于12个样品制备的数据)是125分钟，只有大约20分钟的动手时间。

BD PAXgene Blood RNA Tubes (IVD)应用程序

当该试剂盒与PAXgene血液RNA管一起使用时，该系统提供全血的细胞内RNA用于分子诊断检测的RT-PCR。